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Coloration multimérique des cellules T spécifiques de la phosphoglycérine du cytomégalovirus 65 à des fins diagnostiques et thérapeutiques: une étude comparative

Contexte La cytomégalovirose est une complication grave après transplantation PBSC de cellules souches allogéniques du sang périphérique Si possible, les donneurs de cellules souches pour transplantation sont sélectionnés sur la base de leur statut sérologique CMV Cependant, le statut immunitaire spécifique au cytomégalovirus peut être caractérisé en mesurant la phosphoprotéine CMV 65 Nous avons donc étudié la spécificité et la sensibilité de chacune des trois méthodes et comparé les résultats aux méthodes de dépistage du statut sérologique des patients Vingt-trois échantillons de volontaires séropositifs pour le CMV et 15 échantillons de patients séropositifs pour le CMV avant et après transplantation allogénique PBSC ont été colorées avec des tétramères, pentamères ou streptamères et analysés par cytométrie en fluxRésultats Des fréquences similaires de cellules T CD8 et multimères ont pu être mesurées par les 3 technologies multimères Les signaux de fond les plus bas ⩽002% ont été obtenus en utilisant la technologie des tétramères. 019% -248% de phosphoprotéine de CMV 65 Des lymphocytes T CD8 spécifiques de 495-503 ont été détectés chez des volontaires sains Des lymphocytes T spécifiques d’antigènes ont été détectés chez seulement 11 48% des 23 volontaires séropositifs séropositifs avant le jour 100 après transplantation allogénique de PBSC chez des volontaires séropositifs. Ces résultats démontrent la puissance de la coloration multimère et une certaine limitation des tests sérologiques pour définir les donneurs appropriés pour la transplantation. Par conséquent, chaque fois que possible, les donneurs séropositifs pour le CMV des transplantés aux receveurs séropositifs doivent être examinés pour leur CD8. Fréquence des cellules T Les 3 technologies multimères peuvent être utilisées, donnant des résultats similaires La technologie streptamer offre en outre l’avantage de sélectionner des cellules T CD8 spécifiques à la phosphoprotéine CMV au niveau de la bonne pratique de fabrication pour le transfert de cellules T adoptives

La maladie à cytomégalovirus CMV représente une cause majeure de morbidité et de mortalité chez les patients séropositifs au CMV après transplantation PBSC allogénique de cellules souches du sang périphérique, bien que les donneurs pour la transplantation allogénique de PBSC soient sélectionnés en fonction de leur statut sérologique CMV [1] Transplantation de PBSC à risque grave de CMV, qui se manifeste par des conditions telles que colite CMV, pneumonie, rétinite, méningo-encéphalite et myélotoxicité [2] La phosphoprotéine tégumentaire 65 a été identifiée comme antigène cible majeur du complexe majeur d’histocompatibilité CMV lymphocytes T cytotoxiques restreints de classe I provenant du sang d’individus sains [3-5] Plusieurs peptides non amères ou décamères dérivés de la phosphoprotéine immunogène, l’antigène CMV phosphoprotéine 65, sont spécifiquement reconnus par les lymphocytes T cytotoxiques CD8 [6] La fréquence de tels CMV lymphocytes T CD8 spécifiques de la phosphoprotéine 65 est cruciale pour patie Pour l’identification et la quantification des lymphocytes T spécifiques de l’antigène, plusieurs techniques multimères ont été développées, utilisant des tétramères, des pentamères [7], et des streptamères [8] étude, nous avons comparé la spécificité et la sensibilité des trois technologies multimères disponibles; Nous avons également examiné l’application clinique de streptamères pour le transfert de cellules T antigène-spécifiques au niveau de bonnes pratiques de fabrication. De plus, nous avons examiné si le statut sérologique du donneur et du receveur d’une greffe allogénique PBSC serait prédictif de la réponse T à la fréquence CMV. de la phosphoprotéine du CMV 65 lymphocytes T CD8 spécifiques au 495-503

Les structures de multimères A, le complexe tétramère: complexe majeur d’histocompatibilité molécules du CMH de classe I sont pliées avec le peptide d’intérêt et β2-microglobuline β2-MG et sont tétramérisés par streptavidine B marquée par fluorescence, le complexe pentamère: 5 CMH Les complexes peptidiques de classe I sont multimerizés par un domaine auto-assemblant spiralé C, Le complexe streptamère et le principe de base de la technologie de coloration réversible TCR, récepteur des lymphocytes TFigure 1View largeTélécharger Les structures des multimères A, Le complexe tétramère: complexe majeur d’histocompatibilité MHC les molécules de classe I sont repliées avec le peptide d’intérêt et la β2-microglobuline β2-MG et sont tétramérisées par la streptavidine B marquée par fluorescence. Les complexes peptide pentamère: 5 CMH de classe I sont multimérisés par un domaine auto-assemblé spiralé C, Le complexe streptamère et le principe de base de la technologie de coloration réversible TCR, récepteur des cellules T

Matériaux et méthodes

Échantillons de volontaires sains et de patients Des échantillons de sang périphérique ont été prélevés chez 23 volontaires HLA-A2 sains et 13 patients HLA-A2 ou HLA-B7 après leur consentement éclairé. Les PBMC ont été isolées par Ficoll-Biocoll Separation Solution Préparations vaccinales anticoagulantes anticoagulantes de sang de volontaires sains, ou d’échantillons sanguins de patients avant et après une transplantation de PBSC allogénique La viabilité des PBMC obtenues était toujours> 95%, comme déterminé par coloration au bleu trypan 04% solution de bleu trypan; Sigma-Aldrich Les cellules viables ont été quantifiées dans une chambre Neubauer Zeiss Pour les dosages cellulaires, les PBMCs Ficoll-séparés ont été testés fraîchement ou cryoconservés dans RPMI 1640 contenant 20% de sérum AB humain et 10% de diméthylsulfoxyde Merck et stockés dans de l’azote liquide. des patients inclus dans cette étude sont rapportés dans le tableau 1

st et incubé pendant 40 min à température ambiante dans l’obscurité HLA-A * 0201 / CMV peptide tétramère * phycoérythrine et HLA-B * 0702 / CMV peptide tétramère * phycoérythrine ont été spécifiquement synthétisés à l’Institut Ludwig de recherche sur le cancer Lausanne, Suisse coloration colorée, 10 μL d’isothiocyanate de fluorescéine anti-CD4 * et 10 μL de protéine de chlorophylle peridin anti-CD8 * BD ont été ajoutés et les échantillons ont été maintenus à 4 ° C pendant 20 min dans l’obscurité. fixé avec du paraformaldehyde 05% Sigma pendant 10 min puis analysé par cytométrie de flux FACScan, CellQuest; BD Biosciences Dans tous les cas, au moins 100 000 événements ont été identifiés pour analyse. Chaque échantillon a été analysé avec un isotype approprié, qui a été utilisé pour définir les cellules colorées. L’analyse a été réalisée sur des lymphocytes étroitement bloqués pour exclure les cellules mortes et les débris. échantillons à des concentrations de 005, 0075, 01, 015 et 02 μg par 1 × 106 cellules dans un volume de 100 μL par test et incubés pendant 40 min à température ambiante dans le pentamère peptide HLA-A * 0201 / CMV foncé * R -Phycoérythrine et HLA-B * 0702 / CMV peptide pentamère * R-phycoérythrine ont été spécifiquement synthétisés chez Proimmune La coloration en 3 couleurs a été réalisée comme décrit ci-dessus voir “coloration au tétramère” ci-dessusStreptamer coloration HLA-A2 * 0201 / CMV peptide streptamer * phycoérythrine ou HLA-B * 0701 / CMV peptide streptamer * phycoérythrine a été spécifiquement synthétisé à l’IBA Avant la coloration, le complexe majeur d’histocompatibilité CMV a été multimérisé avec Strep-Tactin marquée à la phycoérythrine pendant 45 min à 4 ° C dans le da Les streptamères rk ont ​​été ajoutés à des concentrations de 01, 02, 03 et 04 μg pour 1 × 106 cellules dans un volume de 100 μL par test et incubés pendant 45 min à 4 ° C dans l’obscurité. La coloration en 3 couleurs a été réalisée comme décrit. Ci-dessus: coloration des tétramères ci-dessus. Purification des cellules CD8T par tri cellulaire magnétique. Les PBMC ont été décongelées et lavées puis sélectionnées par des billes magnétiques CD8 lorsqu’elles sont passées dans une colonne de tri cellulaire selon le protocole de tri cellulaire Miltenyi. Plus de 95% de pureté a été atteinte la fraction CD8; ceci a été confirmé par cytométrie en flux. Ensuite, les lymphocytes T CD8 et les cellules présentatrices d’antigène CD8 ont été soumis à une culture peptidique mixte de peptidesPeptide synthétique Les peptides utilisés dans notre étude correspondaient aux peptides dérivés de la phosphoprotéine CMV HLA-A * 0201 -503 [NLVPMVATV] et HLA-B * 0702 restreints positifs 417-426 [TPRVTGGGAM] et à un peptide dérivé de la protéine de la matrice de la grippe HLA-A * 0201 restreint positif 58-66 [GILGFVFTL] [9] Ces peptides ont été dissous dans diméthyl sulfoxyde mélangé avec du PBS à une concentration de 1 μg / μL pour des expériences individuelles Tous les peptides ont été synthétisés par Thermo Electron Corporation à une pureté d’au moins 95% mesurée par chromatographie liquide à haute performance.Propulation peptidique lymphocytaire mélangée Pour l’amplification de CD8 spécifique au CMV Des lymphocytes T, des cultures mixtes de peptides lymphocytaires ont été réalisées comme décrit ailleurs [9, 10] Brièvement, après isolement des lymphocytes T CD8, le CD8- On a irradié avec 30 Gy et puisé avec 20 ug / ml du CMV ou peptide de la protéine de la matrice grippale pendant 2 h à 37 ° C, suivi d’une étape de lavage après co-incubation avec les lymphocytes T CD8 pendant une nuit à 37 ° C. 99% d’humidité, la culture peptidique lymphocytaire mixte a été complétée avec 10 U / mL d’IL-2 humaine recombinante et 20 ng / mL d’IL-7 Sigma Après 8 jours de culture, les cellules ont été récoltées et évaluées pour la prolifération de CMV-spécifique Cellules T CD8 par coloration au tétramère et analyse FACScan, comme décrit ci-dessus voir “Coloration du tétramère” ci-dessus Criblage sélectif des anticorps IgG anti-CMV Criblage sérologique des anticorps IgG anti-CMV pour les volontaires sains Kit Enzygnost CMV IgG / IgM; Behring et pour les patients CMV-IgG / IgM ELA Test PKS; Medac a été réalisée en utilisant des méthodes standard Les patients et les donneurs étaient considérés comme séropositifs pour le CMV lorsque l’index du test était ⩾11Assessment de l’antigénémie du CMV La phosphoprotéine CMV 65 a été détectée dans les leucocytes par immunofluorescence après sédimentation du dextran et lyse des érythrocytes. échantillons de sang périphérique anticoagulé, appliqués à une lame de microscope, et fixés avec du méthanol-acétone L’expression de la phosphoprotéine 65 du CMV a été évaluée par des anticorps monoclonaux Chemicon et Argene qui reconnaissent différents epitopes de la protéine. Pour la détection de l’anticorps spécifique à l’antigène phosphoprotéine 65 , un anticorps secondaire anti-souris conjugué à l’isothiocyanate de fluorescéine a été utilisé Après contre-coloration au bleu Evans, une analyse semi-quantitative a été réalisée par microscopie à immunofluorescence. L’antigénémie CMV a été exprimée par le nombre de cellules phospho-positives 65-positives pour 500.000 cellules comptées. la génémie a été définie comme 1-10 cellules positives, la qualité intermédiaire a été définie comme 11-100 cellules positives, et la qualité élevée a été définie comme étant> 100 cellules positives

Résultats

Selon la littérature, dans les pays occidentaux développés, la fréquence des individus séropositifs pour le CMV est de 50%. Dans cette étude, nous avons utilisé un kit de test standard pour le dépistage sérologique du CMV qui est utilisé dans le dépistage des donneurs pour la transplantation allogénique PBSC à l’Institut de médecine transfusionnelle, Université d’Ulm Ulm, Allemagne Chez 10 volontaires sains CMV-séronégatifs, nous n’avons pu identifier aucune donnée sur les populations de lymphocytes T CD8 spécifiques au CMV. de 23 volontaires sains séropositifs pour le CMV, nous avons pu détecter les lymphocytes T CD8 spécifiques à la phosphoprotéine CMV. La fréquence des lymphocytes T CD8 reconnaissant spécifiquement l’épitope NLVPMVATV de la phosphoprotéine CMV restreinte par HLA-A2 65 495-503 variait de 019% à 248% , 052% Le niveau de base était de 0%, 000% -002% dans la plupart des procédures La corrélation entre le statut sérologique du CMV et le pourcentage de lymphocytes T CD8 spécifiques du CMV p l’hosphoprotéine 65 495-503 dans cette étude est présentée dans le tableau 2

Tableau 2View largeDownloadCorrelation du cytomégalovirus CMV séropositif et pourcentage de lymphocytes T CD8 spécifiques de la phosphoprotéine CMV 65 495-503 NLVPMVATV chez les volontaires sains HLA-A2Table 2Voir grandDownloader la corrélation du cytomégalovirus CMV séropositif et pourcentage de lymphocytes T CD8 spécifiques de la phosphoprotéine CMV 65 495-503 Comparaison de 3 technologies multimères différentes Nous avons coloré 10 échantillons de volontaires séropositifs pour le CMV séropositifs et positifs au tétramère. Tableau 2 et 15 échantillons de patients séropositifs au CMV avec tétramère * phycoérythrine, pentamère * phycoérythrine ou streptamère * phycoérythrine combinaison avec de l’isothiocyanate de fluorescéine CD4 * et de la protéine chlorophylle CD8 * péridine et analyse des résultats par cytométrie de flux. échantillons de volontaires sains CMV-séropositifs mais tétramères négatifs également testés négatifs dans des tests de coloration au pentamère et au streptamère non montrés Les niveaux de fond ont été déterminés par comparaison avec HLA- A2 et / ou B7-posi Des échantillons de volontaires sains CMV-séronégatifs Pour évaluer la sensibilité et la spécificité des tests multimères, nous avons effectué une comparaison inter-essai qui a mesuré des échantillons de volontaires sains CMV-séropositifs à 3 moments différents avec différentes concentrations de multimères. multimères ont été utilisés pour colorer un culot de 1 x 106 cellules; 1 μL de 044 μmol / L de tétramère, 3 μL 015 μg de pentamère et 10 μL de 02 μg du complexe majeur d’histocompatibilité 05 μmol / L mélangé à 03 μmol / L d’un complexe Strep-Tactin pour streptamer ont été utilisés Figure 2B Des concentrations plus élevées de multimères ont abouti à la détection de fréquences T similaires ou inférieures, indiquant une saturation Des fréquences similaires de lymphocytes T CD8 et multimères ont été détectées par les 3 technologies multimères 2A et 3A Les signaux de fond les plus bas ⩽002% ont été obtenus en utilisant la technologie des tétramères contre 003% -004% en utilisant le pentamère et 003% -007% en utilisant les technologies streptamer. Figure 3B Fréquences de 019% à 1390% de phosphoprotéine de CMV 65 495-503 cellules T CD8 spécifiques, parmi tous les CD8 T cellules, ont été détectés chez des volontaires sains et les tableaux 1 et 2 des patients

Figure 2View largeDownload slideComparaison de 3 différentes technologies multimères HLA-A2 / cytomégalovirus CMV phosphoprotéine 65 spécifique A, tétramère, pentamère et streptamère coloration du maximum de phosphoprotéine CMV 65 cellules T CD8 spécifiques 495-503 B, Différentes quantités de tétramères, des pentamères et des streptamères ont été ajoutés pour obtenir des courbes pour les procédures de coloration optimales PE, phycoérythrine; PerCP, protéine de la chlorophylle de la péridineFigure 2View largeDownload slideComparaison de 3 technologies différentes de multimères HLA-A2 / cytomégalovirus CMV phosphoprotéine 65 spécifique A, tétramère, pentamère et marquage au streptamère du maximum de phosphoprotéine CMV 65 Cellules T CD8 spécifiques à 495-503 B, Différentes des quantités de tétramères, de pentamères et de streptamères ont été ajoutées pour obtenir des courbes pour des procédures de coloration optimales PE, phycoérythrine; PerCP, protéine de la chlorophylle de la péridine

Les lymphocytes T CD8 provenant du sang périphérique de 10 volontaires sains ont été contre-colorés avec des multimères spécifiques pour les épitopes A de lymphoprotéine T de cytomégalovirus restreints HLA-A2 65 495-503. Des fréquences de 019% à 248% des lymphocytes T CD8 spécifiques de 019% à 248% ont été détectées chez des volontaires sains avec des valeurs similaires pour les 3 technologies multimères B, les signaux de fond étaient les plus bas avec la technologie tétramère 00002% versus 003% -004 % en utilisant le pentamère et 003% -007% en utilisant des technologies streptamerFigure 3View largeTélécharger des synopsis des niveaux de signal et de fond en utilisant les technologies tétramère, pentamère et streptamère Les lymphocytes T CD8 du sang périphérique de 10 volontaires sains ont été contrebalancés avec des multimères spécifiques pour le HLA-A2 restreint cytomégalovirus phosphoprotéine 65 495-503 épitopes des lymphocytes T A, Cytomegalovirus ph Des fréquences de 019% à 248% des cellules T CD8 spécifiques de 019% à 248% ont été détectées chez des volontaires sains avec des valeurs similaires pour les 3 technologies multimères B, les signaux de fond étaient les plus faibles avec la technologie tétramère 00002% versus 003% -004% utilisant le pentamère et 003% -007% utilisant des technologies de streptamère Culture peptidique lymphocytaire mixte de volontaires sains CMV-séropositifs et multimères-négatifs et de volontaires séropositifs et multimères sains CMV Les donneurs sains peuvent seulement générer des titres d’IgG suffisamment élevés contre le CMV à l’aide de CD4 T-helper Par conséquent, nous avons demandé si la réponse des lymphocytes T CD8 chez les volontaires séropositifs sains pourrait être trop faible pour être mesurée par une coloration multimérique du sang natif, et si approprié les cellules précurseurs pourraient être efficacement stimulées en exposant les échantillons de sang indigènes à une culture de peptides mixtes lymphocytaires pour un CD8 de huit jours Les lymphocytes T des volontaires sains CMV-séropositifs mais multimères-négatifs n’ont pas été stimulés pour générer des lymphocytes T CD8 spécifiques de la phosphoprotéine CMV au-delà du niveau de fond même après 1 cycle de stimulation Figure 4A Cependant, lorsque lymphocytes T CD8 du CMV-séropositifs et multimères- volontaires positifs en bonne santé ont été soumis à 1 cycle de stimulation avec des cellules autologues CD8- présentatrices de l’antigène irradiées avec CMV peptide, CMV phosphoprotéine 65 495-503 spécifiques cellules T CD8 ont été effectivement élargies figure 4B Avant l’exposition à la culture de peptides lymphocytaires mixtes, le CMV cellules T CD8 spécifiques ont varié de 023% à 134% médiane, 061% de la population totale de cellules T CD8 Après 1 tour de stimulation, les cellules T CD8 spécifiques du CMV ont varié de 166% à 623% médiane, 3090% de la population

Figure 4View largeTélécharger slideColorations lymphocytaires mixtes MLPC de PBMC de cytomégalovirus volontaires séropositifs au CMV et multimères négatifs et MLPC de volontaires sains CMV-séropositifs et multimères positifs Les lymphocytes T CD8 ont été soumis à 1 cycle de stimulation avec un antigène CD8- autologue irradié. Les points représentent le pourcentage de lymphocytes T CD8 positifs à la phycoérythrine PE-tétramère HLA-A2 / CMV. Aucune différence n’a été observée dans les PBMC séropositives et multimères-négatives avant et après. après MLPCs B, Pour les PBMCs séropositives et multimères positives de volontaires sains, une forte augmentation du pourcentage de lymphocytes T CD8 + HLA-A2 / CMV tétramère * PE-PE positifs a pu être observée après MLPC PerCP, protéine de la chlorophylle de la péridineFigure 4View largeTélécharger le peptide lymphocytaire mélangé cultures MLPC de PBMC de cytomégalovirus CMV séropositif et multimer négatif volontaires et MLPC de volontaires sains CMV-séropositifs et multimères positifs Les lymphocytes T CD8 ont été soumis à 1 cycle de stimulation avec des cellules présentatrices de l’antigène CD8 irradiées autologues pulsées avec le peptide CMV comme décrit dans la section A des matériaux et méthodes. le pourcentage de lymphocytes T CD8 positifs à la phycoérythrine PE-positif à la tétramère HLA-A2 / CMV Aucune différence n’a été trouvée dans les PBMCs séropositives et multimères-négatives avant et après les MLPC B. Pour les PBMC séropositives et multimères-positives de volontaires sains, une forte pourcentage de lymphocytes T CD8 + positifs pour le tétramère HLA-A2 / CMV après le MLPC PerCP, l’antigénémie de la chlorophylle péridinique CMV et les lymphocytes CD8T spécifiques du CMV mesurés par multimères chez des patients après transplantation allogénique de PBSC Des échantillons de 12 patients ont été analysés après allogénèse Transplantation de PBSC pour l’antigénémie du CMV et les niveaux de lymphocytes T CD8 spécifiques du CMV. périodes de temps ⩽3 mois, 4-6 mois, 7-12 mois et 13-28 mois après transplantation allogénique PBSC pour 3 échantillons de patients de chaque période de temps L’état de l’antigénémie CMV à chaque moment spécifique a été comparé à la cellule T CD8 Fréquence de la même période de tempsDans 2 des 3 échantillons de patients analysés dans la période de temps ⩽3 mois après la transplantation de PBSC allogénique, une antigénémie de CMV de grade intermédiaire a été observée, bien qu’aucun lymphocyte T spécifique du CMV n’ait pu être détecté dans les PBMC.

Tableau 3Voir grand Diapositive de téléchargementCorrélation de l’antigénémie du cytomégalovirus CMV et des niveaux de lymphocytes T CD8 spécifiques au CMV Tableau 3Voir grand Diapositive de téléchargementCorrélation de l’antigénémie du cytomégalovirus CMV et des niveaux de lymphocytes T CD8 spécifiques au CMV

Discussion

WSHPQFEK qui montre une forte affinité de liaison pour un dérivé de streptavidine ingénierie appelé Strep-Tactin [28] La technologie streptamer offre en outre de nouvelles voies vers une approche thérapeutique innovante: la sélection des cellules T CD8 spécifiques à la phosphoprotéine CMV au niveau de bonne pratique de fabrication pour transfert de cellules T adoptives [29] Le pentamère et le streptamer utilisés dans cette étude ont été achetés dans le commerce. Le tétramère a été mis à disposition par l’Institut Ludwig de recherche sur le cancer dans le cadre d’une coopération scientifique. Les signaux de fond les plus bas ont été obtenus en utilisant la technologie des tétramères. De plus, nous avons trouvé que les lymphocytes T CD8 spécifiques de la phosphoprotéine CMV 65 étaient détectables dans 48% des HLA-A * 0201 séropositifs pour le CMV. -expression des individus, alors que Hebart et al [6] ont détecté une fréquence de 75%. la quantité de cellules T spécifiques au CMV pourrait être la taille de la cohorte analysée, une origine génétique ou ethnique différente de la population étudiée, et des différences dans les tests sérologiques utilisés pour définir des volontaires séropositifs en bonne santé. Cela pourrait démontrer une certaine limitation de la Les lymphocytes T CD8 spécifiques des antigènes sont importants pour la clairance des cellules infectées par le virus ou des cellules tumorales [9, 10, 30]. Des études récentes qui ont effectué des scanners du génome du CMV chez des humains immunocompétents séropositifs pour le CMV ont révélé une large spécificité de la réponse lymphocytaire T cytotoxique spécifique du CMV [31] Cependant, la protéine du tégument viral CMV phosphoprotéine 65 a été définie comme la cible majeure des réponses lymphocytaires T cytotoxiques spécifiques du CMV [3-5] Sur la base des épitopes immunogènes T de la phosphoprotéine CMV 65 pour les types de HLA classe I les plus courants parmi la population blanche, la technologie multimère pour application diagnostique et thérapeutique Dans notre étude, nous avons testé 2 patients qui étaient positifs pour HLA-A2 et B7 pour leur phosphoprotéine CMV respective 65 495-503 cellules T spécifiques Un patient patient 13; le tableau 1 présentait des fréquences de lymphocytes T spécifiques à l’antigène similaires pour les epitopes A2 et B7 L’autre patient patient 3; Le tableau 1 présentait des fréquences de cellules T élevées pour HLA-B7 mais seulement des réponses de lymphocytes T mineures pour les données HLA-A2. En considérant cette variation des fréquences des lymphocytes T spécifiques aux antigènes selon les épitopes des lymphocytes T, on pourrait sous-estimer la la réponse des cellules T Cependant, comme présenté dans le tableau 3, aucun des 5 échantillons de patients avec des cellules T spécifiques CMV mesurables, selon les tests multimères disponibles, avait une antigénémie détectable CMV Par conséquent, on pourrait conclure que, s’il y a un mesurable Réponse de la phosphoprotéine CMV des lymphocytes T chez les patients après transplantation allogénique PBSC, faible risque de réactivation CMV ou maladie CMV chez ces patients En revanche, les 3 patients analysés avant le jour 100 après transplantation allogénique PBSC présentés dans le tableau 3 n’avaient pas de CMV mesurable des lymphocytes T réponse à la phosphoprotéine 65 sur la base des tests multimères disponibles, mais 2 d’entre eux ont développé une antigénémie à CMV de grade intermédiaire. Un de ces 2 patients a eu un patient 3; Le tableau 3 avec réactivation précoce du CMV avant le jour 100 avait, en raison d’un transfert de cellules T antigénique spécifique, des lymphocytes T spécifiques de la phosphoprotéine CMV détectables 5 mois après la transplantation allogénique de PBSC, associée à la disparition de l’antigénémie du CMV. L’antigénémie sans aucun taux de lymphocytes T spécifiques du CMV pourrait être une première indication d’une réponse immunitaire inadéquate à la phosphoprotéine CMV des lymphocytes T et doit également être notée chez les patients présentant une antigénémie de haut grade résistante à la thérapie après transplantation allogénique de PBSC et non mesurable. Les taux de lymphocytes T CMV phosphoprotéine 65, un transfert de cellules T spécifique du CMV phosphoprotéine 65 thérapeutique du CMV pourraient être une option pour la reconstitution d’une réponse immunitaire spécifique chez le patient Sur la base de ce contexte et des données de Ljungman et al. ], qui suggèrent que l’effet bénéfique de la séropositivité au CMV du donneur est médié par le transfert de l’immunité des lymphocytes T donneurs, un dépistage du CMV. En conclusion, il s’agit de la première comparaison, à notre connaissance, de 3 technologies multimères produisant une phosphoprotéine CMV similaire 65 495 Fréquences des lymphocytes T Un dépistage de volontaires séropositifs séropositifs au CMV pour les cellules T spécifiques de la phosphoprotéine CMV est important et doit être évalué dans des études de grande cohorte pour acquérir une compréhension complète du pouvoir de la coloration multimère pour l’identification de donneurs de cellules souches appropriés. De plus, les streptamères produits au niveau des bonnes pratiques de fabrication permettent des transferts cliniques de cellules T adoptives.

Remerciements

Soutien financier Ce travail a été soutenu par le ministère fédéral de l’éducation et de la recherche «Klinische Forschergruppe Klinische Infektiologie: Mechanismen und klinische Implikationen der Immunrekonstitution» au Comprehensive Infectious Diseases Center, Université d’Ulm Conflits d’intérêts potentiels LG est le PDG d’IBA Tous les autres auteurs: non conflits